ACE色譜柱是高性能液相色譜柱,廣泛應用于藥物分析、環境檢測、食品安全、生物化學及科研等領域。ACE色譜柱以其z越的分離效率、高重現性和優異的批次間一致性而受到全球用戶的高度認可。采用先進的封端工藝和雙齒鍵合技術,顯著提高了固定相在j端pH條件下的穩定性(pH 1–12),延長了柱壽命,并減少了堿性化合物的拖尾現象。此外,ACE UltraCore系列采用核殼(core-shell)顆粒技術,在保持高柱效的同時降低背壓,適用于UHPLC和HPLC系統,實現快速、高效分離。
一、使用前的準備與安裝
1、確認兼容性
檢查色譜柱說明書,明確其耐受的pH范圍(如C18柱通常為2-8)、溫度范圍(多數≤60°C)和最大壓力,避免超范圍使用。
避免直接使用與柱內保存溶劑(如甲醇、乙腈)互溶性差的流動相(如緩沖鹽溶液),防止鹽析出或溶劑混合放熱損傷固定相。
2、正確安裝與沖洗
連接色譜柱時,確保管線接口無顆粒雜質,手擰接頭至輕微阻力后,再用扳手固定1/4圈,避免漏液或死體積過大。
新柱活化:用低流速(0.3-0.5 mL/min)的初始流動相(如反相柱用10%甲醇水)沖洗30-60分鐘,逐步升高流速至目標值,避免驟變沖擊柱床。
舊柱重啟:長期閑置的色譜柱,先用保存溶劑(如純乙腈)沖洗至基線平穩,再用分析流動相平衡。
二、使用中的操作規范
1、流動相管理
緩沖鹽使用:
梯度洗脫時,有機溶劑比例需緩慢升高(每次增加≤10%),并在每個梯度后保持5-10分鐘穩定流速,防止鹽析出。
混合流動相時,先將水相(含緩沖鹽)與有機相分別過濾,再按比例混合,避免局部濃度過高。
緩沖液需現配現用,存放不超過3天,避免微生物繁殖或成分降解(可添加0.02%疊氮h鈉抑菌)。
流動相過濾與脫氣:所有流動相(尤其是水相)需經0.45μm濾膜過濾,并采用在線脫氣或超聲脫氣(20分鐘),避免氣泡進入色譜柱導致柱效下降或基線波動。
2、樣品預處理
生物樣品(如血清、細胞裂解液)需經離心(10000 rpm,10分鐘)+0.22μm濾膜過濾,去除蛋白、細胞碎片等雜質。
化學樣品若含鹽或高濃度有機物,可用固相萃取(SPE)或稀釋法降低基質干擾。
3、操作條件控制
避免流動相組成及極性的劇烈變化,防止固定相塌陷或柱效下降。
柱溫不超過色譜柱的溫度使用范圍,高溫分析后需緩慢降至室溫再沖洗,避免熱脹冷縮導致柱床結構破壞。
三、使用后的清洗與保存
1、日常清洗
緩沖鹽體系:
立即沖洗:分析結束后,先用高水相流動相(如95%水+5%有機相)以1 mL/min流速沖洗30-60分鐘,徹d置換出柱內緩沖鹽。
有機溶劑過渡:再用純有機相(乙腈或甲醇)沖洗20-30分鐘,去除疏水雜質,防止長期殘留滋生微生物。
特殊污染清洗:
蛋白殘留:用0.1 M NaOH溶液或含10%乙腈的0.1%甲酸溶液沖洗,再用純水和有機相沖洗。
金屬離子污染:反相柱可用10 mM EDTA水溶液沖洗,絡合金屬離子后再用水和有機相清洗。
強保留物質:用強洗脫溶劑(如s氫呋喃、二甲基亞砜)以低流速(0.2-0.5 mL/min)沖洗,每次10-15分鐘,重復2-3次。
2、長期保存
反相柱:充滿純乙腈或甲醇(防腐、防干柱),兩端密封,垂直存放于陰涼處(避免陽光直射)。
正相柱:充滿正己烷-異丙醇(9:1)混合溶劑,防止固定相干裂。
離子交換柱:用20%乙醇水溶液保存,抑制微生物生長,避免鹽結晶。
四、日常維護與故障排查
1、定期檢測柱效
每周用標準樣品(如甲苯、萘)測試柱效,記錄理論塔板數(N)和對稱因子(As)。若N下降≥20%或As>1.5,提示柱效下降,需及時清洗或再生。
2、柱頭污染處理
若柱壓升高但柱效未顯著下降,可能是柱頭篩板堵塞。可小心卸下柱頭螺絲,用鑷子取出篩板,超聲清洗(純水→甲醇,各15分鐘)后裝回,或更換新篩板。
3、避免極d操作
禁止流動相長時間停流(如超過2小時),防止固定相干縮或樣品擴散至柱床深層。
